|
|
Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství
Doubová, Dominika ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
ABSTAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studentka: Dominika Doubová Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo blíže představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), který lze v rámci vědeckého výzkumu využívat jako alternativní modelový organismus k obratlovcům. Model se jeví ekonomicky výhodnějším a morálně akceptovatelnějším, což je podstatný fakt v současné době, kdy stále roste tlak na upouštění testování zejména na obratlovcích. Experimentální část této práce se pak věnuje optimalizaci využití larvy G. mellonella jakožto modelového organismu v rámci výzkumu popáleninových zranění s fungálním infektem, vyvolaným kvasinkou Candida albicans. V rámci experimentů byly larvy využívány pro přípravu tkáňových explantů, na kterých probíhalo šetření formování monodruhového kvasinkového biofilmu. Metody: Před získáváním tkáňových explantů byly larvy usmrceny dekapitací. Za účelem omezení kontaminace tkáňových vzorků především střevní mikrobiotou larev byl optimalizován přístup odstranění trávicí trubice. Popáleninové rány byly indukovány post mortem pomocí...
|
|
|
Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství
Doubová, Dominika ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
ABSTAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studentka: Dominika Doubová Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo blíže představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), který lze v rámci vědeckého výzkumu využívat jako alternativní modelový organismus k obratlovcům. Model se jeví ekonomicky výhodnějším a morálně akceptovatelnějším, což je podstatný fakt v současné době, kdy stále roste tlak na upouštění testování zejména na obratlovcích. Experimentální část této práce se pak věnuje optimalizaci využití larvy G. mellonella jakožto modelového organismu v rámci výzkumu popáleninových zranění s fungálním infektem, vyvolaným kvasinkou Candida albicans. V rámci experimentů byly larvy využívány pro přípravu tkáňových explantů, na kterých probíhalo šetření formování monodruhového kvasinkového biofilmu. Metody: Před získáváním tkáňových explantů byly larvy usmrceny dekapitací. Za účelem omezení kontaminace tkáňových vzorků především střevní mikrobiotou larev byl optimalizován přístup odstranění trávicí trubice. Popáleninové rány byly indukovány post mortem pomocí...
|
|
|
Příprava a charakterizace slepičích protilátek proti patogenní kvasince Candida albicans
Vodecký, Matúš ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Nárůst počtu infekcí způsobených kvasinkovými patogeny je alarmujícím problémem celosvětového veřejného zdraví. Nejvíce jsou ohroženi lidé s narušeným imunitním systémem, jako např. po infekci virem lidské imunodeficience nebo při diabetes mellitus. Diagnostika je častokrát nedostatečná a léčba je odkázána na omezený výběr antimykotik, na která navíc narůstá rezistence. Tyto aspekty představují velký problém, jelikož je pak na rezistentní patogeny třeba podávat léky druhé volby, které mohou mít vedlejší toxické účinky (např. nefrotoxicita v případě amfotericinu B). Vzhledem k závažnosti kvasinkových infekcí je snaha najít způsob ochrany vůči těmto patogenům. Jednou z možností je pasivní imunoterapie. V této bakalářské práci byly pro tento účel zvoleny protilátky ze slepičích vajec, které mají potenciál širokého terapeutického použití. Příprava slepičích protilátek IgY ze žloutků vajec je jak z etického, tak ekonomického pohledu výhodná. Žloutkové protilátky navíc vykazují poměrně vysokou stabilitu. Z vajec slepic imunizovaných buď buněčnou stěnou nebo celými buňkami C. albicans po kultivaci v médiu simulujícím vaginální prostředí (VSF) byly izolovány polyklonální protilátky. Reaktivita protilátek byla testována metodou ELISA. Jako antigen byly použity buněčné stěny C. albicans kultivovaných v médiu...
|
|
|
Slepičí protilátky proti patogenní kvasince Candida albicans
Konečná, Lucia ; Heidingsfeld, Olga (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
4 Abstrakt Kvasinka Candida albicans patří mezi nejrozšířenější patogenní kvasinky. Jako oportunní patogen osídluje především sliznice hostitele a infekci způsobuje obzvlášť u jedinců s oslabeným imunitním systémem. Nejčastější infekci, způsobenou C. albicans je vaginální mykóza, s kterou se během života setkají alespoň 3 ze 4 žen. K léčbě tohoto onemocnění se využívají antimykotika, vůči kterým jsou ale kvasinky stále méně citlivé. Z tohoto důvodu je snaha vyvíjet stále nové možnosti léčby (nejen) infekcí způsobených C. albicans. Ačkoli vaginální mykóza ve většině případech není závažným onemocněním, jedná se o velmi rozšířenou infekci, která se u mnoha žen projevuje opakovaně, někdy i víckrát ročně. Protože vaginální mykóza snižuje kvalitu života mnoha žen, rozhodli jsme se zaměřit v této práci právě na toto onemocnění. V tomto projektu byly využívány slepičí protilátky, které mají oproti savčím protilátkám řadu výhod. U vejcorodých živočichů se protilátky nacházejí nejen v krevním séru, jak je tomu u savců, ale jsou také sekretovány do vajec. Díky tomu je izolace slepičích protilátek neinvazivní a etická. Navíce metody izolace protilátek z vajec jsou taky jednoduší oproti izolaci z krevního séra. V konečném výsledku jsou slepičí protilátky také ekonomičtější, protože výtěžek slepičích protilátek může být...
|
|
|
Roles of antigen presenting cells in regulation of Th17 response against Candida albicans
Böhmová, Helena ; Dobeš, Jan (vedoucí práce) ; Kostovčíková, Klára (oponent)
Candida albicans je běžný patobiont, který osidluje mukózní povrchy napříč tělem svého hostitele. Ve zdravých jedincích se vyskytuje jako neškodná součást mikrofory. V imunokompromitovaných jedincích se však C. albicans stává patogenní a způsobuje rozsáhlé mukózní infekce, kdy v nejvážnějších případech uniká do krevního řečiště a způsobuje život ohrožující infekce tkání uvnitř svého hostitele. Ačkoliv součásti přirozené imunity, které zajišťují časnou imunitní odpověď proti C. albicans jsou poměrně dobře popsány, současné znalosti týkající se T buněčné odpovědi proti této kvasince jsou relativně omezené. Několik populací antigen-prezentujících buněk bylo doposud propojeno s nastavením protektivní Th17 odpovědi proti C. albicans - například přirozené lymfoidní buňky typu 3, konvenční dendritické buňky a CX3CR1+ mononukleární fagocyty. Buněčné a molekulární mechanismy, které indukují C. albicans-specifcké T buňky, však zůstávají nepopsané. Tato práce se zaměřuje na roli přímé prezentace antigenů na MHCII molekulách jednotlivými populacemi antigen-prezentujících buněk v indukci antigenně-specifckých T buněk rozeznávajících C. albicans. Tato problematika je zkoumána v kontextu mukózní kolonizace i krevní infekce touto kvasinkou. V první části práce jsou shrnuta dostupná data zabývající se...
|
|
|
Vývoj metod pro analýzu interakce antivirotika ritonaviru s lanosterol-14- α-demethylasou patogenních kvasinek
Burdová, Tereza ; Heidingsfeld, Olga (vedoucí práce) ; Dostál, Jiří (oponent)
Ritonavir je inhibitor proteasy HIV a byl používán jako součást lékových koktejlů pro vysoce aktivní antivirovou terapii (HAART). Orofaryngeální kandidóza je jednou z nejčastějších oportunních infekcí u pacientů trpících AIDS. Ukázalo se, že pokud byli léčeni koktejly obsahujícími inhibitory proteasy HIV včetně ritonaviru, trpěli orofaryngeální kandiózou v mnohem menší míře než pacienti, jimž byly podávány léky bez proteasových inhibitorů. Důvodem může být fakt, že inhibitory proteasy HIV inhibují, byť s vysokým Ki, taktéž proteasy patogenních kvasinek. Jiným vysvětlením může být, že některé z těchto inhibitorů blokují lanosterol-14-α-demethylasu, klíčový enzym biosyntézy ergosterolu, který je důležitou součástí kvasinkových membrán. Obsahem práce je izolace mikrosomální frakce patogenních kvasinek Candida albicans a Candida parapsilosis a optimalizace metod pro analýzu inhibice kvasinkové lanosterol-14-α-demethylasy ritonavirem. Klíčová slova: ritonavir, Candida albicans, Candida parapsilosis, lanosterol-14-α- demethylasa, mikrosomální frakce
|
|
|
Evolution of mixed cultures of the pathogenic yeasts Candida albicans and Candida guilliermondii
Hirko, Dominik ; Heidingsfeld, Olga (vedoucí práce) ; Schierová, Michaela (oponent)
Cílem této práce bylo zjistit, jak se mění kokultury kvasinek Candida albicans a Candida guilliermondii v průběhu času, jednak za kontrolních podmínek a též pod vlivem flukonazolu. Tyto druhy jsou oportunní fungální patogeny, které se značně liší ve své citlivosti k nejčastěji používanému antimykotiku - flukonazolu. Po krátkém úvodu do společných rysů studovaných druhů, jejich mechanizmu patogeneze a léčby infekcí, které způsobují, se tato práce věnuje růstovým křivkám obou mikroorganizmů za vybraných podmínek a taktéž procesu umělé evoluce pomocí modelu pasážování kokultur. Poté byly tyto populace C. albicans a C. guillieromondii zkoumány pomocí qPCR a chromogenních médií. qPCR analýza odhalila, že za kontrolních podmínek v kulturách převládá C. albicans (CA). Možným důvodem je 20 % kratší generační doba, jak ukazuje růstová křivka. V přítomnosti flukonazolu bylo možno pozorovat dva trendy. Jeden souvisí s přirozenou rezistencí C. guilliermondii (CG) a vedl k tomu, že CG byla na konci pasážování dominantní. Druhý trend vedl k dominanci CA, přestože tato kvasinka je za normálních okolností k flukonazolu citlivá. Na základě tohoto zjištení byla testovaná minimalní inhibiční koncentrace (MIC50) náhodně vybraných kolonií CA. V experimentu, kde ve 12. pasáži CA převládla, došlo až k 10- násobnému...
|
|
|
Transport amonných iontů u kvasinek
Faltýnková, Kateřina ; Palková, Zdena (vedoucí práce) ; Princová, Jarmila (oponent)
Bakalářská práce - Kateřina Faltýnková - Transport amonných iontů Amoniak a amonné ionty jsou pro kvasinkové buňky nesmírně důležité, a to ne pouze v metabolismu, například syntéze aminokyselin, ale také jako signální molekuly, které slouží ke komunikaci mezi koloniemi, popřípadě k regulaci pseudohyfálního růstu. Transport amoniaku a amonných iontů vyžaduje aktivní transport, který je zajišťován MEP permeázami dovnitř buňky a pravděpodobnými exportéry ATO proteiny ven z buňky. V této práci jsou popsány rodiny genů MEP a ATO, se zaměřením na jejich význam pro příjem a export amonných iontů kvasinkou a také regulace těchto dvou rodin genů u kvasinek Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Cryptococcus neoformans a Yarrowia lipolytica.
|
|
|
Průkaz rezistence na echinokandinová antimykotika u Candida sp. pomocí molekulárně biologických metod
Vitáčková, Petra ; Chrenková, Vanda (vedoucí práce) ; Nyč, Otakar (oponent)
Invazivní infekce vyvolané rodem Candida, zvláště pak jeho nejvýznamnějším zástupcem C. albicans, patří mezi vážné komplikace, zejména u imunokompromitovaných pacientů. Případný výskyt rezistence k jednotlivým antimykotikům značně komplikuje terapii invazivních mykóz a zvyšuje morbiditu a mortalitu u těchto pacientů. Cílem této práce bylo zavedení rychlé metody detekce rezistence na kaspofungin prostřednictvím hmotnostní spektrometrie MALDI-TOF. Testování bylo prováděno na referenčním kmenu C. albicans CCM8261 a kmenu C. albicans M30 s prokázanou rezistencí na echinokandiny. K měření bylo použito dvou různých nastavení přístroje a pro následné vyhodnocení získaných spekter byla využita korelační a shluková analýza (dendrogram). V průběhu analýzy bylo zjištěno, že publikované nastavení měření nelze aplikovat, neboť pro každý hmotnostní spektrometr je vždy nutno pracovat s nastavením od výrobce. Pomocí shlukové analýzy se podařilo odlišit citlivý a rezistentní kmen. Kvalita získaných spekter byla relativně nízká, což mohlo být způsobeno použitím nevhodného kultivačního média. Shluková analýza prokázala možnost stanovení citlivosti pomocí hmotnostní spektrometrie, nicméně další pokusy zohledňující poznatky získané v této studii budou nutné pro případné zavedení metody do rutinní praxe. Powered by TCPDF...
|
|
|
CUG kodon u patogenních kvasinek rodu Candida
Marečková, Lucie ; Heidingsfeld, Olga (vedoucí práce) ; Půta, František (oponent)
1. Abstrakt Mnoho druhů kvasinek rodu Candida překládá standardní leucinový kodon CUG jako serin, ovšem ne v 100% případů. Ukázalo se, že dvojí specifita CUG kodonu se vyvíjela pomocí mechanismu zahrnujícího dvojznačné kódování zprostředkované unikátní tRNACAG, která je in vitro častěji aminoacylována serinem než leucinem. Tato dvojznačnost byla tolerována některými kandidami více jak 170 miliónů let. Prozatím nejlepším možným vysvětlením této tolerance je, že nestandardní překlad CUG způsobil vznik genové diverzity a umožnil produkci nového fenotypu odolnějšího vůči stresovým podmínkám. Důležitým krokem byla zároveň redukce negativního vlivu dvojznačné translace pomocí klíčových mutací ve struktuře ser-tRNACAG. Kandidy se staly cenným experimentálním modelem pro objasnění změn v genetickém kódu. Zatímco byly důsledky dvojího překladu CUG kodonu studovány hlavně u druhu Candida albicans, ve spojitosti s kvasinkou Candida parapsilosis nebylo toto téma prozatím diskutováno. Vyřešení struktury sekretované aspartátové proteázy Sapp1p z C. parapsilosis nám poskytlo nástroj ke studiu případů možného vlivu dvojznačného překladu CUG kodonu. Gen SAPP1 obsahuje jeden CUG kodon a na jeho místo dosazovaný serin se ve struktuře proteinu nachází ve smyčce v těsné blízkosti aktivního místa.
|
host ::
RSS.